96孔PCR儀是一種用于進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)的實(shí)驗(yàn)設(shè)備,能夠同時(shí)對(duì)96個(gè)樣品進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。它廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)、醫(yī)學(xué)診斷、基因研究等領(lǐng)域,為科研人員提供了高效、便捷的實(shí)驗(yàn)工具;通過控制溫度的變化,使DNA在變性、退火、延伸等步驟中進(jìn)行循環(huán)復(fù)制,從而實(shí)現(xiàn)特定DNA片段的快速擴(kuò)增。在實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀中,還能在擴(kuò)增過程中實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào),對(duì)目標(biāo)基因進(jìn)行定量分析。
96孔PCR儀的結(jié)構(gòu)組成:
-熱循環(huán)系統(tǒng):是PCR儀的核心部件,能夠準(zhǔn)確控制反應(yīng)體系的溫度變化,確保PCR反應(yīng)的各個(gè)階段在合適的溫度下進(jìn)行。其加熱和冷卻速度較快,可有效縮短PCR循環(huán)周期時(shí)間,提高實(shí)驗(yàn)效率。
-樣本支持系統(tǒng):通常配備96孔的標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)板,用于放置待擴(kuò)增的樣品。這種標(biāo)準(zhǔn)化的設(shè)計(jì)使得樣品的處理和操作更加方便,也便于與其他實(shí)驗(yàn)設(shè)備和試劑進(jìn)行配套使用。部分PCR儀還支持不同類型的反應(yīng)板,如384孔板等,以滿足不同規(guī)模實(shí)驗(yàn)的需求。
-熒光檢測(cè)系統(tǒng):在實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀中,熒光檢測(cè)系統(tǒng)用于監(jiān)測(cè)反應(yīng)過程中的熒光信號(hào)。它包括激發(fā)光源、光路傳輸系統(tǒng)和熒光檢測(cè)器等。光學(xué)系統(tǒng)能夠保證高光密度與一致的導(dǎo)光距離,消除光學(xué)邊緣效應(yīng),提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性和靈敏度。
96孔PCR儀的使用注意事項(xiàng):
1.儀器操作方面
-開機(jī)順序:先打開電腦,再打開定量PCR儀底座開關(guān),最后啟動(dòng)配套的軟件,避免因開機(jī)順序不當(dāng)導(dǎo)致儀器無法正常啟動(dòng)或出現(xiàn)故障。
-禁止人為干擾:部分PCR儀上部有蓋的部分為全自動(dòng)控制,在通電狀態(tài)下嚴(yán)禁任何形式人為干擾上蓋開啟或者關(guān)閉的行為,否則會(huì)導(dǎo)致上蓋故障,影響儀器的正常使用。
-定期維護(hù):按照儀器的使用說明書,定期對(duì)PCR儀進(jìn)行清潔、校準(zhǔn)和維護(hù),確保儀器的性能穩(wěn)定和檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
2.實(shí)驗(yàn)操作方面
-防止污染:整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程要在無菌、無核酸酶污染的環(huán)境中進(jìn)行,避免外界因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。實(shí)驗(yàn)前要對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行消毒和清潔,實(shí)驗(yàn)過程中要佩戴一次性手套、口罩和帽子等,防止雜質(zhì)和微生物進(jìn)入反應(yīng)體系。
-準(zhǔn)確加樣:使用移液器加樣時(shí),要確保移液器的準(zhǔn)確性和精度,定期對(duì)移液器進(jìn)行校準(zhǔn)。加樣過程中要避免氣泡產(chǎn)生,以免影響反應(yīng)體系的體積和成分,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確。
-避免交叉污染:在取樣和加樣的過程中,需要使用不同的移液器和吸頭,避免不同樣品之間的交叉污染。同時(shí),要注意PCR板和封板膜的清潔,防止殘留的樣品或試劑對(duì)其他孔造成污染。
-貼膜規(guī)范:使用封板膜時(shí),要注意撫平封板膜,避免產(chǎn)生氣泡,影響熒光信號(hào)的檢測(cè)。并且要確保封板膜覆蓋PCR板的各個(gè)孔,防止液體蒸發(fā)。
3.試劑與耗材方面
-試劑質(zhì)量:確保使用的PCR試劑質(zhì)量可靠,在有效期內(nèi)使用。不同廠家、不同批次的試劑可能會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響,因此在使用前最好進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn),以選擇合適的試劑。
-耗材選擇:選用質(zhì)量好、透明度高、無熒光背景干擾的96孔PCR板和光學(xué)級(jí)封板膜,以保證熒光信號(hào)的檢測(cè)效果。同時(shí),要注意PCR板的平整度和孔的均一性,避免因PCR板的質(zhì)量問題導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確。